Üks maailm üks võitlus
Ktiivne rahvusvaheline koostöö, et luua globaalne kogukond ühise saatuse kogukond, mis reageerib-19 pandeemilisele väljakutsele
Uue koronaviiruse pühkimine kogu maailmas on põhjustanud jätkuva globaalse ahnuse-19 pandeemilise kriisi. Romaanis Coronaviirusel pole piire, sellest lahingust Covid-19 vastu ei säästa ühtegi riiki. Vastuseks sellele ülemaailmsele Covid-19 pandeemiale annab limiväljak Corp panuse meie globaalsete kogukondade heaolu toetamiseks.
Meie maailm seisab praegu silmitsi uudse Coronaviiruse haiguse 2019 (COVID-19) pandeemia enneolematu mõjuga. Praeguseks pole selle haiguse raviks tõhusat ravimit. Siiski on Covid-19 tuvastamiseks välja töötatud palju diagnostilisi teste. Need testid põhinevad molekulaarsel või seroloogilisel meetodil uudse koronaviirusspetsiifilise nukleiinhappe või antikehade biomarkerite tuvastamiseks. Kuna Covid-19 on jõudnud pandeemilise seisundini, on uudse koronaviiruse nakkuse varajane diagnoosimine viiruse leviku hindamisel ja selle sisaldamisel kriitilise tähtsusega, kuid täiuslik test universaalseks kasutamiseks pole veel olemas. Peame teadma, milliseid teste võiks potentsiaalselt kasutada sõeluuringuid, diagnoosige ja jälgida jahutakse-19 nakkust ning millised on nende piirangud. On väga oluline, kuidas neid teaduslikke vahendeid paremini kasutada ning aidata tuvastada ja kontrollida selle kiiresti leviva ja raske haiguse tekkimist.
Uue koronaviiruse tuvastamise eesmärk on välja selgitada, kas indiviidil, kellel on 19-nakkuse nakkus, või asümptootiline kandja, kes võib viirust vaikselt levitada, pakkuda olulist teavet kliinilise ravi otsuste tegemiseks. Varasemad uuringud on näidanud, et 70% kliinilistest otsustest sõltub testimistulemustest. Erinevate tuvastusmeetodite kasutamisel on ka tuvastusreaktiivide komplektide nõuded erinevad.
Joonis 1
Joonis 1:Skeem, mis näitab üldiste biomarkeri tasemete võtmestaadiume COVID-19 nakkuse tüüpilise aja jooksul. X-telg näitab nakkuste arvu ja y-telg näitab viiruse koormust, antigeenide kontsentratsiooni ja antikehade kontsentratsiooni erinevatel perioodidel. Antikehad viitavad IGM -i ja IgG antikehadele. Nii RT-PCR kui ka antigeeni tuvastamist kasutatakse uudse koronaviiruse olemasolu või puudumise tuvastamiseks, mis on otsene tõend patsientide varajase avastamise kohta. Nädala jooksul pärast viirusnakkust on eelistatud PCR -i tuvastamine või antigeenide tuvastamine. Pärast uudset koronaviiruse nakkust umbes 7 päeva jooksul on IGM -i antikeha uudse koronaviiruse vastane veres järk -järgult suurenenud, kuid eksistentsi kestus on lühike ja selle kontsentratsioon väheneb kiiresti. Seevastu IgG antikeha on viiruse vastu hiljem, tavaliselt umbes 14 päeva pärast viiruse nakkust. IgG kontsentratsioon suureneb järk -järgult ja see püsib pikka aega veres. Seega, kui IGM tuvastatakse patsiendi veres, tähendab see, et viirus on hiljuti nakatunud, mis on varajane nakkuse marker. Kui patsiendi veres tuvastatakse IgG antikeha, tähendab see, et viirusnakkus on olnud juba mõnda aega. Seda nimetatakse ka hiliseks infektsiooniks või eelnevaks nakkuseks. Seda nähakse sageli patsientidel, kes on taastumisfaasis.
Uudse koronaviiruse biomarkerid
Uudne koronaviirus on RNA viirus, mis koosneb valkudest ja nukleiinhapetest. Viirus tungib peremeesorganismi (inimese) kehasse, siseneb rakkudele sidumiskoha kaudu, mis vastab retseptori ACE2 -le, ja replitseerub peremeesrakkudes, põhjustades inimese immuunsussüsteemi reageerima võõrastele sissetungijatele ja toodaks spetsiifilisi antikehi. Seetõttu saab viaalnukleiinhappeid ja antigeene ning spetsiifilisi antikehi uudse koronaviiruse vastu suunatud teoreetiliselt kasutada spetsiifiliste biomarkeritena uudse koronaviiruse tuvastamiseks. Nukleiinhapete tuvastamiseks kasutatakse kõige sagedamini RT-PCR-tehnoloogiat, samas kui seroloogilisi meetodeid kasutatakse tavaliselt uudsete koronaviirus-spetsiifiliste antikehade tuvastamiseks. Praegu on saadaval mitmesuguseid katsemeetodeid, mille saame valida Covid-19 nakkuse testimiseks [1].
Uute koronaviiruse peamiste katsemeetodite põhiprintsiipud
Siiani on saadaval palju COVID_19 diagnostilisi teste, kus iga päev saab hädaolukorra kasutamise loa alusel rohkem katsekomplekte. Ehkki uued testide arengud tulevad välja nii paljude erinevate nimede ja vormingutega, tuginevad kõik praegused Covid_19 testid põhimõtteliselt kahele peamisele tehnoloogiale: viirusliku RNA nukleiinhapete tuvastamine ja seroloogilised immunoanalüüsid, mis tuvastavad viirusspetsiifilised antikehad (IGM ja IgG).
01. Nukleiinhapete tuvastamine
Pöördtranskriptsiooni-polümeraasi ahelreaktsioon (RT-PCR), silmuse vahendatud isotermilise amplifikatsiooni (lamp) ja järgmise põlvkonna järjestamine (NGS) on tavalised nukleiinhappe meetodid uudse koronaviiruse RNA tuvastamiseks. RT-PCR on esimest tüüpi COVID-19 jaoks, mida soovitavad nii Maailma Terviseorganisatsioon (WHO) kui ka USA haiguste tõrje ja ennetamise keskuse (CDC).
02.seroloogilised antikehade tuvastamine
Antikeha on inimkehas toodetud kaitsevalk, vastusena viiruse nakkusele. IGM on varajane antikeha tüüp, samas kui IgG on hilisem tüüpi antikeha. Seerumi või plasmaproovi uuritakse tavaliselt antikeha spetsiifiliste IGM- ja IgG-tüüpide olemasolu osas, et hinnata hukka-19 nakkuse ägedaid ja parandavaid faase. Need antikehadel põhinevad tuvastusmeetodid hõlmavad kolloidset kuldse immunokromatograafia testi, lateksi või fluorestsentsmikrosfääri immunokromatograafiat, ensüümiga seotud immunosorbendi testi (ELISA) ja kemoluminestsentsi testi.
03. Viraalne antigeenide tuvastamine
Antigeen on viiruse struktuur, mille inimkeha tunnustab, mis käivitab immuunkaitsesüsteemi antikehade tootmiseks, et puhastada viirus verest ja kudedest. Viirusel esinevat viiruse antigeeni saab sihtida ja tuvastada immunotesti abil. Nagu viiruse RNA, esinevad ka viiruse antigeenid nakatunud inimeste hingamisteedel ja neid saab kasutada hubase-19 nakkuse ägeda faasi diagnoosimiseks. Seetõttu on sageli soovitatav koguda ülemiste hingamisteede proovid nagu sülg, nasofarüngeaalsed ja orofarüngeaalsed tampoonid, sügav köha röga, bronhoalveolaarne loputusvedelik (BALF) antigeeni esialgseks testimiseks.
Uue koronaviiruse testimismeetodite valimine
Testimismeetodi valimine hõlmab paljusid tegureid, sealhulgas kliiniline seadistamine, kvaliteedikontrolli testimine, pöördeaeg, testimiskulud, proovivõtu kogumise meetodid, labori personali tehnilised nõuded, rajatiste ja seadmete nõuded. Nukleiinhapete või viiruse antigeenide tuvastamine on otsesed tõendid viiruste esinemise kohta ja kinnitada uudse koronaviiruse nakkuse diagnoosi. Ehkki antigeenide tuvastamiseks on palju meetodeid, on nende uudse koronaviiruse tuvastustundlikkus teoreetiliselt madalam kui RT-PCR amplifikatsioonil. Antikehade testimine on inimkehas toodetud viirusetõrje antikehade tuvastamine, mis on ajaliselt mahajäänud ja mida sageli ei saa kasutada varajaseks avastamiseks viiruse nakkuse ägeda faasi ajal. Avastusrakenduste kliiniline seade võib varieeruda ja ka proovide kogumise kohad võivad olla erinevad. Viiruslike nukleiinhapete ja antigeenide tuvastamiseks tuleb proov koguda hingamisteede, kus viirus on, näiteks nasonfarüngeaalsed tampoonid, orofarüngeaalsed tampoonid, röga või bronhoalveolaarne loputusvedelik (BALF). Antikehadepõhiseks tuvastamiseks tuleb vereproovi koguda ja uurida spetsiifilise viirusetõrje antikeha (IGM/IgG) olemasolu. Kuid antikehade ja nukleiinhappe testi tulemused võivad üksteist täiendada. Näiteks kui testimistulemuseks on nukleiinhappe-negatiivne, IgM-negatiivne, kuid IgG-positiivne, näitavad need tulemused, et patsient ei kanna praegu viirust, vaid on taastatud uudsest koronaviiruse nakkusest. [2]
Uudsete koronaviiruse testide eelised ja puudused
Uue koronaviiruse kopsupõletiku diagnoosimis- ja raviprotokollis (uuringu versioon 7) (välja antud riikliku tervisekomisjoni ja traditsioonilise Hiina meditsiini riikliku administratsiooni poolt 3. märtsil 2020) kasutatakse nukleiinhapete testimist romaani diagnoosimise kuldstandardina Koronaviiruse nakkus, samas kui antikehade testimist peetakse ka diagnoosi üheks kinnitusmeetodiks.
Patogeensed ja seroloogilised leiud
(1) Patogeensed leiud: uudset koronaviiruse nukleiinhapet saab tuvastada nasofarüngeaalsetes tampoonides, röga, alumiste hingamisteede sekretsioonides, vere, väljaheidete ja muude proovide korral, kasutades RT-PCRAND/või NGS-meetodeid. See on täpsem, kui proovid saadakse alumisest hingamisteedest (röga või õhutrakti ekstraheerimine). Proovid tuleks testimiseks esitada nii kiiresti kui võimalik pärast kogumist.
(2) seroloogilised leiud: NCP-viiruse spetsiifiline IGM saab tuvastatavaks umbes 3-5 päeva pärast algust; IgG saavutab vähemalt 4-kordse suurenemise tiitrimise ajal, võrreldes ägeda faasiga.
Testimismeetodite valimine sõltub aga geograafilistest asukohtadest, meditsiinilistest eeskirjadest ja kliinilistest oludest. USA-s andis NIH välja Coronaviiruse haiguse 2019 (COVID-19) ravijuhised (sait ajakohastatud: 21. aprill 2020) ja FDA andis välja koronaviiruse haiguste diagnostiliste testide poliitika-2019 rahvatervise hädaolukorras (välja antud 16. märtsil 20120. ), milles valiti IGM/IgG antikehade seroloogiline testimine ainult sõeluuringuna.
Nukleiinhapete tuvastamise meetod
RT_PCR on väga tundlik nukleiinhappe test, mille eesmärk on tuvastada, kas uudne koronaviiruse RNA on hingamisteede või muu proovi korral. Positiivne PCR-testi tulemus tähendab uudse koronaviiruse RNA esinemist proovis, et kinnitada hubase-19 infektsiooni. Negatiivne PCR -testi tulemus ei tähenda viiruse nakkuse puudumist, kuna seda võib mõjutada kehv proovi kvaliteet või haiguse ajapunkt taastatud faasis jne. Kuigi RT-PCR on väga tundlik test, on sellel mitu puudust. RT-PCR-testid võivad olla töömahukad ja aeganõudvad, sõltuvalt valimi kõrgest kvaliteedist. See võib olla väljakutse, kuna viiruse RNA kogus ei varieeru mitte ainult erinevate patsientide vahel, vaid võib sama patsiendi puhul erineda sõltuvalt proovide kogumise ajapunktidest, samuti nakkuse faasid või kliiniliste sümptomite ilmnemine. Uue koronaviiruse tuvastamine nõuab kvaliteetseid proove, mis sisaldavad piisavas koguses puutumatut viiruslikku RNA-d.
RT-PCR-test võib anda vale negatiivse tulemuse (valenegatiivne) mõnele patsiendile, kellel on jahutus-19 infektsioon. Nagu me teame, asuvad romaani koronaviiruse peamised nakkuskohad kopsu ja alumise hingamisteede juures, näiteks alveoolid ja bronchi. Seetõttu peeti sügava köha või bronhoalveolaarse loputusvedeliku (BALF) rögaproovi viiruse tuvastamiseks suurimat tundlikkust. Kliinilises praktikas kogutakse proovid aga ülemiste hingamisteede traktist, kasutades nasofarüngeaalseid või orofarüngeaalseid tampooni. Nende isendite kogumine pole mitte ainult patsientide jaoks ebamugav, vaid nõuab ka spetsiaalselt koolitatud personali. Proovide võtmise vähem invasiivseks või lihtsamaks muutmiseks võib mõnel juhul patsientidele anda suukaudsed tampoonid ja võimaldada neil võtta proovi bukaalse limaskestast või keelest ise. Ilma piisava viiruse RNA-d võib RT-qPCR saada valenegatiivse testi tulemuse. Hiinas Hubei provintsis teatati RT-PCR tundlikkusest esialgses avastamisel vaid umbes 30–50%, keskmiselt 40%. Vale-negatiivse kõrge määra põhjustas tõenäoliselt ebapiisav proovivõtmine.
Lisaks nõuab RT-PCR test kõrgelt koolitatud personali keerukate RNA ekstraheerimise etappide ja PCR-i võimendamise protseduuri läbiviimiseks. See nõuab ka kõrgemat bioohutuse kaitset, spetsiaalset laboratoorset rajatist ja reaalajas PCR-instrumenti. Hiinas tuleb RT-PCR test Covid-19 tuvastamiseks läbi viia 2. taseme laboratooriumides (BSL-2), personali kaitsega, kasutades biosfekti 3. taseme (BSL-3) praktikat. Nende nõuete kohaselt suutis jaanuari algusest kuni 2020. aasta veebruari alguseni tuvastada Hiina Wuhani CDC laboratooriumi suutlikkus vaid paarsada juhtumit päevas. Tavaliselt ei oleks see muude nakkushaiguste testimisel probleem. RT-PCR-ist saab aga globaalse pandeemia, näiteks COVID-19-ga potentsiaalselt miljonite testitavate inimestega tegelemisel kriitiliseks probleemiks tänu oma nõuetele spetsiaalsetele laboriruumidele või tehnilistele seadmetele. Need puudused võivad piirata RT-PCR-i kasutamist tõhusa sõeluuringu vahendina ja võivad testimistulemuste aruannetes põhjustada ka viivitusi.
Seroloogiliste antikehade tuvastamise meetod
Haiguse kursuse edenemisega, eriti kesk- ja hilisel etapil, on antikehade tuvastamise määr väga kõrge. Wuhani Kesk-Lõunahaiglas toimunud uuring näitas, et antikehade tuvastamise määr võib Covid-19 nakkuse kolmandal nädalal ulatuda enam kui 90% -ni. Samuti on antikeha inimese immuunvastuse tulemus uudse koronaviiruse vastu. Antikehade test pakub RT-PCR ees mitmeid eeliseid. Esiteks testid seroloogilised antikehad lihtsad ja kiired. Antikehade külgvoolukatseid saab kasutada hoolduspunkti jaoks, et tulemus 15 minutiga saavutada. Teiseks on seroloogilise testi abil tuvastatud sihtmärk antikeha, mis on teadaolevalt palju stabiilsem kui viiruslik RNA. Kogumise, transpordi, ladustamise ja testimise ajal on antikehade testide proovid üldiselt stabiilsemad kui RT-PCR proovid. Kolmandaks, kuna antikeha on vereringes ühtlaselt jaotunud, on nukleiinhappe testiga võrreldes proovivõtu variatsioonid vähem. Antikehade testi jaoks vajalik proovimaht on suhteliselt väike. Näiteks on antikehade külgmise voolu testis kasutamiseks piisav 10 mikroliitrit sõrmepükste verd.
Üldiselt valitakse antikehade test täiendusvahendiks nukleiinhapete tuvastamiseks, et parandada uudse koronaviiruse avastamise määra haiguste kursuste ajal. Kui antikehade testi kasutatakse koos nukleiinhappe testiga, võib see suurendada testi täpsust Covid19 diagnoosimisel, vähendades võimalikke valepositiivseid ja vale-negatiivseid tulemusi. Praegune tegevusjuhend ei soovita sõltumatu avastamisvormina kasutada kahte tüüpi testi, vaid seda tuleks kasutada kombineeritud vorminguna. [2]
Joonis 2:Nukleiinhappe ja antikehade testi tulemuste õige tõlgendamine uudse koronaviiruse nakkuse tuvastamiseks
Joonis 3:Bio-Products Co., Ltd.-uudne koronaviiruse Igm/IgG antikehade kahekordse kiire testi komplekt (Strongstep®SARS-COV-2 IGM/IgG antikehade kiire test, lateks immunokromatograafia)
Joonis 4:Bio-Products Co., Ltd.-tugevstep®Uue koronaviiruse (SARS-COV-2) multipleksse reaalajas PCR komplekt (kolme geeni tuvastamine, fluorestsentsondi meetod).
Märkus:See väga tundlik, kasutatava PCR-komplekt on pikaajaliseks salvestamiseks saadaval lüofiliseeritud vormingus (külmkuivatusprotsess). Komplekti saab toatemperatuuril vedada ja ladustada ning see on ühe aasta stabiilne. Iga eelseansi toru sisaldab kõiki PCR-amplifikatsiooni jaoks vajalikke reaktiive, sealhulgas pöördtranskriptaas, Taq polümeraas, praimerid, sondid ja DNTPS-substraadid. Kasutajad saavad segu lihtsalt uuesti taastada, lisades PCR-klassi vett koos malliga ja seejärel malliga ja seejärel koorma Amplifikatsiooni käivitamiseks PCR -instrumendile.
Vastuseks uudsele koronaviiruse puhangule on Liming Bio-Products Co., Ltd. kiiresti töötanud välja kahe diagnostilise komplekti väljatöötamiseks, et võimaldada kliiniliste ja rahvatervise laboratooriume kiiresti diagnoosida hunnik-19 nakkust. Need komplektid on väga sobivad kasutamiseks suuremahuliseks sõeluuringuks riikides ja piirkondades, kus uudne koronaviiruse puhang levib kiiresti, ning diagnoosimise ja kinnituse pakkumiseks Covid-19 nakkuse jaoks. Need komplektid on mõeldud kasutamiseks ainult eelnevalt valitud hädaolukorra kasutamise loa (PEUA) korral. Testimine piirdub laboratooriumidega, mis on kinnitatud riiklike või kohalike omavalitsuste määruste alusel.
Antigeeni tuvastamise meetod
1. viiruse antigeenide tuvastamine klassifitseeritakse samasse otsese tuvastamise kategooriasse kui nukleiinhapete tuvastamine. Need otsesed tuvastusmeetodid otsivad proovide viiruse patogeenide tõendeid ja neid saab kasutada kinnitusdiagnostikaks. Antigeeni tuvastamise komplektide väljatöötamine nõuab aga tugevat afiinsust ja kõrge tundlikkusega monoklonaalsete antikehade kõrget kvaliteeti, mis on võimeline patogeenseid viirusi ära tundma ja hõivama. Monoklonaalse antikeha valimiseks ja optimeerimiseks kulub tavaliselt rohkem kui kuus kuud, mis sobib kasutamiseks antigeeni tuvastuskomplekti valmistamiseks.
2. Praegu on uudse koronaviiruse otsese tuvastamise reagendid alles teadus- ja arendustegevuse etapis. Seetõttu pole ühtegi antigeeni tuvastuskomplekti kliiniliselt valideeritud ja müügil kättesaadav. Ehkki varem teatati, et Shenzheni diagnostikaettevõte on välja töötanud antigeenide tuvastamise komplekti ja seda testiti kliiniliselt Hispaanias, ei saanud testi usaldusväärsust ja täpsust kinnitada reagentide kvaliteediprobleemide tõttu. Praeguseks ei ole NMPA (endine Hiina FDA) veel ühegi kliiniliseks kasutamiseks ühegi antigeeni tuvastuskomplekti heaks kiitnud. Kokkuvõtteks on välja töötatud mitmesuguseid tuvastusmeetodeid. Igal meetodil on oma eelised ja piirangud. Erinevate meetodite tulemusi saab kasutada kontrollimiseks ja täiendamiseks.
3. Kvaliteetse Covid-19 testkomplekti tootmine sõltub suuresti optimeerimisest teadus- ja arendustegevuse ajal. Luping Bio-Product Co., Ltd. Testkomplektid peavad vastama rangetele tootmis- ja kvaliteedikontrolli standarditele, et tagada kõrgeim jõudlus ja järjepidevus. Bio-Product Co., Ltd. teadlastel on üle kahekümne aasta kogemus in vitro diagnostikakomplektide kavandamisel, testimisel ja optimeerimisel, et tagada analüütilise kvantifitseerimise kõrgeim jõudlus.
Ajavahetuse-19 pandeemia ajal seisis Hiina valitsus silmitsi tohutu nõudluse pärast rahvusvahelistes levialades epideemia ennetusmaterjalide järele. 5. aprillil, Riigi nõukogu ühise ennetamise ja kontrollimehhanismi pressikonverentsil "tugevdades meditsiiniliste materjalide kvaliteedijuhtimist ja reguleerides turukorraldust", on Jiang Fan, ministeeriumi väliskaubanduse osakonna esimese astme inspektor Commerce ütles: "Järgmisena keskendume oma jõupingutustele kahele aspektile, esiteks kiirendada rahvusvahelise kogukonna vajalike rohkemate meditsiinitarvete toetust ja ka toodete kvaliteedikontrolli, reguleerimise ja haldamise parandamiseks. Anname Hiina panuse globaalsele epideemiale ühiseks reageerimisse ja kogukonna loomisel inimkonna ühise tulevikuga.
Joonis 5:Liming Bio-Products Co., Ltd. Uudne Coronaviirusreagent on saanud EL CE registreerimistunnistuse
Autunnistus
Houshenshan
Joonis 6. Liimsed bioproduktid Co., Ltd. Toetas Wuhan Vulcan (Houshenshan) mägihaiglat, et võidelda Covid-19 epideemia vastu ning talle anti Wuhan Punase Risti autunnistus. Wuhan Vulcani mägihaigla on Hiina kuulsaim haigla, mis on spetsialiseerunud raskehutuse raviks - 19 patsienti.
Kuna uudne koronaviiruse puhang levib kogu maailmas, astub Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd., et toetada ja aidata kogukondi kogu maailmas meie innovaatiliste tehnoloogiatega selle enneolematu ülemaailmse ohu vastu võidelda. COVID-19 nakkuse kiire testimine on selle ohu käsitlemisel kriitiline osa. Anname jätkuvalt olulisel viisil panuse, pakkudes kvaliteetseid diagnostilisi platvorme eesliinil tervishoiutöötajate kätte, et inimesed saaksid vajalikke kriitilisi testimistulemusi. Liming Bio-Products Co., Ltd. pingutused lahingus Covid-19 pandeemia vastu on meie tehnoloogiate, kogemuste ja teadmiste panus rahvusvahelistele kogukondadele ülemaailmse saatuse kogukonna ehitamiseks.
Pikk ajakirjandus ~ skannige ja jälgige meid
E -post: sales@limingbio.com
Veebisait: https://limingbio.com
Postiaeg: mai-01-2020
